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大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒的技術(shù)資料

更新時(shí)間:2018-11-20      點(diǎn)擊次數(shù):1900
   大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。下面分析大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法。
 
  一、選擇試劑
 
  選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
 
  二、加樣
 
  大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒可能原因:
 
  1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
 
  2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));
 
  3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
 
  大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒解決辦法:
 
  1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
 
  2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
 
  3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
 
  4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
 
  5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
 
  常見大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn),不看就沒了!
 
  我公司技術(shù)專員對(duì)解析出其實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn),下面一起來看看吧。
 
  1. 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等;
 
  2. 根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量;
 
  3. 按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑;
 
  4. 標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備,盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者,注意低溫保存。
 
  實(shí)驗(yàn)中為了確定*佳信號(hào)和*背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測(cè)抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí),應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
 
  標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前,瞬時(shí)離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
 
  一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
 
  為了優(yōu)化靈敏度,建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí),如血清,建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
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