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關(guān)于小鼠ELISA試劑盒的操作方法或許你了解的還不夠多

更新時(shí)間:2021-09-26      點(diǎn)擊次數(shù):1530

    小鼠ELISA試劑盒--小鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子1(STAT1)ELISA試劑盒是經(jīng)我司專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員檢定并得到國(guó)內(nèi)各大高校實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì),課題組認(rèn)可的科研用ELISA試劑盒,該產(chǎn)品靈敏度高,特意性強(qiáng),檢測(cè)測(cè)定樣本的結(jié)果穩(wěn)定準(zhǔn)確,做科研實(shí)驗(yàn)找我們就對(duì)了。

    小鼠ELISA試劑盒的操作方法:

    雙抗體夾心法:

    1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌,下同)。

    2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

    3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

    4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。

    5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

    6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

    間接法:

    1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜;

    2.次日洗滌3次;

    3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;

    4.(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;

    5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;

    6.’最后一遍用DDW洗滌。

    其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
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