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干粉培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎

更新時間:2019-07-18      點擊次數(shù):1740
   干粉培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎,直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供培養(yǎng)基的保證。
 
  干粉培養(yǎng)基的配制
 
  培養(yǎng)基可按處方配制,也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。
 
  在制備培養(yǎng)基時,應選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分進行配制。脫水培養(yǎng)基應附有處方和使用說明,配制時應按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求,不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。干粉培養(yǎng)基或單獨配方組分應在適當?shù)臈l件下儲存,如低溫、干燥和避光,所有的容器應密封,尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。商品化的成品培養(yǎng)基除了應附有處方和使用說明外,還應注明有效期、貯存條件、適用性檢查試驗的質(zhì)控菌和用途。
 
  商品化成品干粉培養(yǎng)基
 
  為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠,各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應準確稱量,并要求有一定的度。配制培養(yǎng)基常用的溶劑是純化水,特殊情況下,可能需要用去離子水和蒸餾水。應記錄各稱量物的重量和水的使用量。配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應潔凈,可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留。對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應預先進行滅菌,以保證培養(yǎng)基的無菌性。
 
  脫水型培養(yǎng)基應*溶解于水中,再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶,應注意不要過度加熱,以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其它組分時,加入后應充分混勻。
 
  應按照生產(chǎn)商提供或使用者驗證的參數(shù)進行培養(yǎng)基的滅菌。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術,特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌。
 
  干粉培養(yǎng)基若采用不適當?shù)募訜岷蜏缇鷹l件,有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或 pH 的改變。因此,培養(yǎng)基應采用驗證的滅菌程序滅菌,培養(yǎng)基滅菌方法和條件,應通過無菌性試驗和促生長試驗進行驗證。此外,對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證,以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導致干粉培養(yǎng)基的過熱,過度滅菌可能會破壞絕大多數(shù)的細菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此,應根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性,進行全面的滅菌程序驗證。,
 
  應確定每批干粉培養(yǎng)基滅菌后的 pH(冷卻至室溫 25℃測定)。若培養(yǎng)基處方中列出 pH 的范圍,除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的 pH 允許的變化范圍很寬,否則,pH的范圍不能超過規(guī)定的±0.2。
 
  制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應進行下列檢查:容器和蓋子不得破裂,裝量應相同,盡量避免形成氣泡,固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪,干粉培養(yǎng)基在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶,不得污染微生物等。應檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。
 
  培養(yǎng)基的貯存
 
  自配的培養(yǎng)基應標記名稱、批號、配制日期等信息,并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標簽上應標有名稱、批號、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關特性,生產(chǎn)商和使用者應根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進行保存,所采用的保藏和運輸條件應使成品培養(yǎng)基限度的失去水分并提供機械保護。
 
  培養(yǎng)基滅菌后若儲藏在高壓滅菌器中,質(zhì)量可能會受影響,一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在 0℃或 0℃以下存放,因為冷凍可能破壞凝膠特性。
 
  培養(yǎng)基應避光保存,若要長期保存,應置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板現(xiàn)配現(xiàn)用,如置冰箱保存,一般不超過一周,且應密閉包裝,若延長保存,保存期需經(jīng)驗證確定。
 
  固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次,以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用的水浴加熱或流通蒸汽。若使用微波爐,應避免培養(yǎng)基過度受熱及水分的蒸發(fā),更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應置于 45~50℃的水浴中,不得超過 8 小時。傾注培養(yǎng)基時,應擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分,避免容器外壁的水滴進入培養(yǎng)基中造成污染。
 
  使用過的干粉培養(yǎng)基(包括失效的培養(yǎng)基)應按照國家污染廢物處理相關規(guī)定進行處理。
 
  培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗
 
  實驗室應對試驗用培養(yǎng)基建立質(zhì)量控制程序(也就是要有培養(yǎng)基質(zhì)控sop),以確保所用培養(yǎng)基質(zhì)量符合相關檢測的需要。
 
  實驗室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于其制備過程,采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復蘇,從而影響試驗結(jié)果的可靠性。
 
  配制好的培養(yǎng)基應定期進行質(zhì)量控制試驗。實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目是 pH,適用性檢查試驗,定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應依據(jù)適用性檢查試驗確定培養(yǎng)基質(zhì)量是否符合要求。有效期的長短將取決于在一定存放條件下(包括容器特性及密封性)的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性。
 
  在實驗室中,若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控,那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可只進行一次,試驗的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關附錄中進行選擇,也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株。干粉培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗若不符合規(guī)定,應尋找不合格的原因,以防止問題重復出現(xiàn)。任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用。
 
  用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護。用于關鍵區(qū)域監(jiān)控的培養(yǎng)基要雙層包裝和終端滅菌,如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基,那么在使用前應進行100%的預培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
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